人树突状细胞培养

树突状细胞不分裂，但可以培养和激活。

材料

DC细胞

介质：添加10%胎牛血清的RPMI 1640或专用的无血清培养基

培养瓶或培养皿

步骤

1.    按照标准程序解冻并计数细胞。

2.    将细胞浓度调整为每毫升500000个细胞。此浓度可根据您的实验进行调整。

3.    细胞密度为1–2 x 105/ c㎡。

4.    细胞可以立即或隔夜培养后用于实验。

5.    收集细胞

a)      收集培养基并装入试管中。立即将PBS添加到贴壁细胞中，上下移动移液管冲洗培养皿表面并收集入试管最红；

b)     向培养皿中加入PBS，并将培养皿置于37°C的培养箱中10-15分钟。在此期间，细胞应开始从培养皿表面脱离。当用相差显微镜观察时，它们变得更圆、更亮。

c)      将PBS中的细胞与a中的细胞混合；

注意点:

1.    DC作为粘附细胞和非粘附细胞的混合物生长，粘附细胞的比例取决于培养基和刺激物。这使得将它们从一个培养皿移到下一个培养皿或进行收集过程变得复杂化。细胞的得率通常低于起始细胞数。在培养中需要考虑此因素

2.    树突状细胞不增殖。它们将在培养环境中存活1周或更长时间。如果细胞需要持续培养超过一夜，建议添加500 U/ml GM-CSF和500 U/ml IL4，以确保维持DC表型。

3.    树突状细胞没有被激活。根据CD83的表达分析，它们被认为是不成熟的

4.    可以用LPS刺激DC，但必须包括血清。血清提供可溶性CD14，其结合LPS并促进与TLR4的结合。可以使用胎牛血清。