抗原特异性T细胞测定

材料

T细胞

PBMC

抗原

培养基:其他培养基也可能支持T细胞激活

丝裂霉素 C

操作步骤

1. 用丝裂霉素C处理PBMC。

a.用PBS将PBMC浓度调至 5 x 10⁶/ml。

b. 将25ug/mL浓度的丝裂霉素C添加到PBMC中；

c.   在37°C孵化45分钟；

d.用每次至少10ml的PBS清洗细胞三次；

2. 在96孔板中加入PBMC细胞（100,000 cells per well）

3．在一定浓度梯度范围内添加抗原

4. 在96孔板中加入T细胞（20,000 cells per well）

5. 在37°C，5% CO₂孵化1-4天。比较推荐在在第四天观察细胞增殖；对于因子分泌情况的测定，可以在24-48h后收集上清进行检测。

注意点

1. 对于增殖而言，观察CD4+细胞增殖的一个很好的观察指标, 但CD8+ T细胞似乎需要添加IL-2, IL-15 或 IL-12后才能观察到增殖。

2. CD8+ T细胞的活化可以通过细胞因子的产生来测量。在抗原刺激后可产生干扰素γ和 TNF-α。

3. 如果主要观察因子分泌数据, 那么PBMC可不进行灭活；

4.测量细胞因子情况和细胞增殖可以在一个实验中同时进行观察。